CD37 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404423-ACT

O CD37 humano é uma proteína de superfície celular da família das tetraspaninas, enriquecida em células B e em outros subconjuntos de leucócitos, onde organiza microdomínios de membrana que coordenam o agrupamento de receptores e a transdução de sinais. Por meio de interações com proteínas parceiras e com quinases/fosfatases associadas, o CD37 modula a sinalização do receptor de células B, a adesão e a motilidade de células imunes e programas de ativação induzidos por antígeno. O CD37 contribui para a regulação de sinais de sobrevivência e diferenciação em compartimentos linfoides e é frequentemente estudado no contexto da biologia de células B e dos mecanismos de doenças hematológicas. Sua expressão e função também são relevantes para a dinâmica do microambiente imune e para vias de tráfego de leucócitos.

CD37 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD37 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD37 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD37 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD37, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD37. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD37 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD37 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD37 em células tumorais com expressão de CD37 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.