CD30L CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423454

概要

Tnfsf8はCD30L（TNFSF8）をコードしており、TNFスーパーファミリーに属するII型膜結合性リガンドです。CD30LはCD30（TNFRSF8）と結合し、免疫細胞間のコミュニケーションを調節します。CD30L–CD30シグナルは、NF-κBおよびMAPK依存性の転写プログラムに影響を与え、T細胞の共刺激、サイトカイン産生、活性化誘導性分化の形成に関与します。また、細胞の状況に応じて細胞生存の判断にも影響し得ます。マウスモデルでは、この軸はリンパ組織の構築、胚中心反応、免疫調節異常やリンパ増殖性表現型に関連する炎症性シグナル伝達ネットワークの制御といった観点で、しばしば研究されています。

CD30L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTnfsf8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tnfsf8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tnfsf8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD30Lタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD30Lシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tnfsf8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD30Lの機能に不可欠なTnfsf8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tnfsf8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD30L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCD30L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tnfsf8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD30L HDRプラスミド（m）および CD30L HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTnfsf8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTnfsf8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。