CD1C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403813-ACT

CD1C（CD1c分子）は、非古典的なMHCクラスI様の抗原提示糖タンパク質で、主に樹状細胞のサブセットおよび一部のB細胞に発現しています。CD1Cは脂質／糖脂質抗原に結合してT細胞に提示します。微生物由来および自己脂質リガンドの提示を介して、CD1Cは適応免疫応答の開始と方向づけに寄与し、抗原処理・提示経路の文脈でサイトカインの偏り（極性化）にも影響を与えます。CD1C陽性樹状細胞は病原体の感知や自然免疫プログラムとのクロストークにも関与し、脂質抗原の利用可能性をT細胞活性化および免疫恒常性と結び付けます。CD1Cの発現変動やCD1c制限性の免疫認識は、炎症性疾患や自己免疫疾患、感染症応答、腫瘍関連の免疫リモデリングにおいて検討されています。

CD1C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD1Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD1C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD1C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD1C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD1Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD1C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD1C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD1C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD1C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。