Plasmide Double Nickase (h) CD1A: sc-401734-NIC

CD1A code une glycoprotéine non classique apparentée au CMH de classe I, exprimée principalement par les cellules dendritiques et les cellules de Langerhans, où elle présente aux lymphocytes T des antigènes lipidiques et glycolipidiques. En se liant à des ligands lipidiques du soi et d’origine microbienne et en engageant des récepteurs des lymphocytes T spécifiques, CD1A contribue à la surveillance immunitaire spécifique des antigènes et à l’orientation des réponses immunitaires cutanées et muqueuses. La présentation lipidique dépendante de CD1A s’articule avec le trafic endocytaire, le traitement des antigènes et les programmes de différenciation des cellules présentatrices d’antigène induits par les cytokines. Des altérations de l’expression ou de la fonction de CD1A ont été associées à des maladies inflammatoires de la peau, à l’inflammation allergique et aux microenvironnements immunitaires tumoraux, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques en immunologie.

CD1A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD1A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.