Plasmide Double Nickase (h) CD16-B: sc-417469-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD16-B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD16-B Double Nickase (h) et le plasmide CD16-B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FCGR3B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD16-B Antibody (Z64): sc-73799
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD16-B | sc-417469-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD16-B | sc-417469-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FCGR3B code pour CD16-B, un récepteur Fc gamma ancré au glycosylphosphatidylinositol (GPI) exprimé principalement à la surface des neutrophiles, qui se lie aux complexes immuns contenant des IgG et contribue aux réponses effectrices médiées par les Fc. CD16-B participe à la clairance des complexes immuns et module l’adhésion des neutrophiles, la dégranulation et la signalisation inflammatoire via une communication croisée avec les intégrines et des kinases en aval, façonnant ainsi l’activation de l’immunité innée. Des variations du nombre de copies et des polymorphismes alléliques de FCGR3B ont été associés à une expression modifiée du récepteur et à une susceptibilité accrue à l’inflammation induite par les complexes immuns, notamment dans le lupus érythémateux systémique et d’autres phénotypes auto-immuns. En tant qu’immunorécepteur de surface, CD16-B est fréquemment étudié dans le contexte de la biologie des neutrophiles, des réponses dépendantes des anticorps et de la régulation des voies inflammatoires.
CD16-B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FCGR3B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FCGR3B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FCGR3B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FCGR3B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.