CD133 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-437381-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CD133O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase CD133 (m) e o Plasmídeo Double Nickase CD133 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Prom1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CD133 Anticorpo (E-11): sc-365537
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CD133 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-437381-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD133 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-437381-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Prom1 codifica a glicoproteína de membrana pentaspânica CD133, uma proteína que se liga ao colesterol e é enriquecida em protrusões da membrana plasmática, ajudando a organizar microdomínios de membrana e a regular a polaridade celular. Em tecidos de camundongo, o CD133 é amplamente utilizado como marcador de compartimentos de células-tronco e progenitoras e está ligado a programas que controlam a autorrenovação, a diferenciação e a regeneração tecidual. A sinalização associada ao CD133 se cruza com vias que governam a organização epitelial e a dinâmica do citoesqueleto, e alterações na expressão de Prom1 são relatadas em modelos de degeneração retiniana, defeitos do neurodesenvolvimento e fenótipos de células iniciadoras de tumor. Estudos funcionais de Prom1, portanto, esclarecem mecanismos de comprometimento de linhagem, epitélios formadores de barreira e estados celulares do tipo “stem” relevantes para a biologia de doenças.
CD133 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Prom1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Prom1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Prom1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Prom1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.