Plasmide Double Nickase (h) CD13: sc-401095-NIC

ANPEP code pour CD13, une aminopeptidase alanyl membranaire dépendante du zinc, exprimée sur les cellules myéloïdes, dans les compartiments endothéliaux et dans divers tissus épithéliaux, où elle régule le traitement extracellulaire des peptides et l’approvisionnement en acides aminés. CD13 participe au contrôle protéolytique de peptides bioactifs et intervient dans l’adhérence et la motilité cellulaires ainsi que dans le remodelage du microenvironnement, reliant l’activité enzymatique à la signalisation inflammatoire et à l’homéostasie tissulaire. Par ses effets sur le trafic des leucocytes, les réponses angiogéniques et les réseaux de protéases, CD13 est fréquemment utilisée comme marqueur fonctionnel de la différenciation myéloïde et des états d’activation cellulaire. Une expression ou une activité dérégulée d’ANPEP/CD13 a été associée à des modifications du comportement des cellules immunitaires et des interactions stromales associées aux tumeurs, ce qui soutient des études mécanistiques en inflammation et en biologie du cancer.

CD13 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ANPEP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ANPEP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ANPEP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ANPEP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.