Plasmide Double Nickase (h) CD100: sc-405956-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD100 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD100 Double Nickase (h) et le plasmide CD100 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SEMA4D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD100 Antibody (C-3): sc-390675
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD100 | sc-405956-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD100 | sc-405956-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SEMA4D code pour CD100, une sémaphorine transmembranaire qui existe également sous forme d’ectodomaine soluble et qui intervient dans une signalisation bidirectionnelle via des récepteurs tels que plexin‑B1/B2 et CD72. CD100 régule l’activation des cellules immunitaires, les seuils de signalisation des cellules B, la production de cytokines et la migration des leucocytes, et influence aussi le guidage neuronal et les réponses angiogéniques via des voies associées aux GTPases de la famille Rho et à la PI3K. Par ces processus, CD100 participe à la modulation des interactions tumeur–système immunitaire, au remodelage tissulaire inflammatoire et aux mécanismes de neuro‑inflammation. Une dérégulation de la signalisation SEMA4D/CD100 a été associée à une altération de la surveillance immunitaire et à une inflammation pathologique dans de multiples contextes pathologiques.
CD100 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SEMA4D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SEMA4D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SEMA4D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SEMA4D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.