CBP/KAT3A/CREBBP Plasmide Double Nickase (m): sc-419797-NIC

Crebbp codifica la CREB-binding protein (CBP/KAT3A) del topo, un coattivatore trascrizionale multifunzionale e un’istone acetiltransferasi che acetila gli istoni e diversi substrati non istonici, modulando l’accessibilità della cromatina e l’output trascrizionale. CBP integra segnali provenienti da CREB, dai recettori nucleari, da p53 e da fattori associati a Wnt/β-catenina per regolare il controllo del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA, la plasticità neuronale e programmi di differenziamento specifici di linea. Attraverso la modulazione dell’attività degli enhancer e dell’allungamento trascrizionale, CBP contribuisce a coordinare reti geniche che governano lo sviluppo e la funzione immunitaria. La deregolazione dell’acetilazione e dell’attività di coattivatore dipendenti da CREBBP è associata ad alterazioni degli stati epigenetici rilevanti per fenotipi dello sviluppo e per programmi trascrizionali legati al cancro.

CBP/KAT3A/CREBBP Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Crebbp nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Crebbp. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Crebbp. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Crebbp interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.