CBP/KAT3A/CREBBP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400200-ACT

CREBBP codifica la CREB-binding protein (CBP/KAT3A), un coattivatore trascrizionale e acetiltransferasi della lisina che acetila istoni e substrati non istonici per modulare l’accessibilità della cromatina e l’espressione genica. CBP integra segnali provenienti da CREB, dai recettori nucleari e da fattori di trascrizione dello sviluppo, coordinando programmi coinvolti nel controllo del ciclo cellulare, nelle risposte al danno al DNA, nella differenziazione e nella plasticità neuronale. Attraverso i suoi ruoli nella funzione degli enhancer e nell’allungamento trascrizionale, CBP partecipa a vie come la segnalazione cAMP/CREB e, più in generale, alla regolazione epigenetica della trascrizione specifica di linea cellulare. Un’alterazione dell’attività o del dosaggio di CREBBP è associata a fenotipi di neurosviluppo ed è ricorrentemente implicata nella disregolazione trascrizionale e della cromatina associata al cancro.

CBP/KAT3A/CREBBP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CREBBP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CBP/KAT3A/CREBBP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CREBBP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CREBBP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CBP/KAT3A/CREBBP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CREBBP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CBP/KAT3A/CREBBP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CBP/KAT3A/CREBBP nelle cellule tumorali con espressione di CREBBP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.