Plasmide CRISPR d'Activation (h) CBP/KAT3A/CREBBP: sc-400200-ACT

CREBBP code pour la protéine de liaison à CREB (CBP/KAT3A), un coactivateur transcriptionnel et une acétyltransférase des lysines qui acétyle les histones et des substrats non histoniques afin de moduler l’accessibilité de la chromatine et l’expression génique. CBP intègre des signaux provenant de CREB, des récepteurs nucléaires et de facteurs de transcription du développement, en coordonnant des programmes impliqués dans le contrôle du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, la différenciation et la plasticité neuronale. Par ses rôles dans la fonction des enhancers et l’élongation transcriptionnelle, CBP participe à des voies telles que la signalisation AMPc/CREB et, plus largement, à la régulation épigénétique de la transcription spécifique de lignée. Une activité ou un dosage altérés de CREBBP sont associés à des phénotypes neurodéveloppementaux et sont fréquemment impliqués dans des dérégulations transcriptionnelles et de la chromatine liées au cancer.

CBP/KAT3A/CREBBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CREBBP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CBP/KAT3A/CREBBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CREBBP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CREBBP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CBP/KAT3A/CREBBP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CREBBP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CBP/KAT3A/CREBBP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CBP/KAT3A/CREBBP dans les cellules tumorales présentant une expression de CREBBP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.