Plasmide Double Nickase (h) cathepsin Z: sc-403244-NIC

CTSZ code la cathepsine Z, une protéase cystéine lysosomale qui contribue au renouvellement intracellulaire des protéines et au traitement des peptides au sein du système endo‑lysosomal. Au-delà de son rôle protéolytique, la cathepsine Z peut influencer les interactions cellule–matrice et les fonctions des cellules immunitaires en régulant des voies liées à l’adhésion, à la migration et au traitement des antigènes. Des altérations de l’expression ou de l’activité de CTSZ ont été rapportées dans des contextes d’inflammation et de biologie tumorale, où le remodelage lysosomal et la dynamique de la matrice extracellulaire façonnent le comportement cellulaire. Par conséquent, CTSZ est fréquemment étudié dans les mécanismes reliant une signalisation dépendante des protéases à la régulation immunitaire et au remodelage du microenvironnement.

cathepsin Z Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CTSZ dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CTSZ. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CTSZ. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CTSZ.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.