catalase Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419459-ACT

Mouse Cat codifica a catalase, uma enzima peroxissomal com grupo heme que decompõe o peróxido de hidrogênio em água e oxigênio para manter o equilíbrio redox celular. Ao limitar o acúmulo de H2O2, a catalase molda a sinalização por espécies reativas de oxigênio, protege lipídios e proteínas contra danos oxidativos e dá suporte à coordenação metabólica entre peroxissomos e mitocôndrias. A atividade de Cat se integra a redes de defesa antioxidante e a respostas inflamatórias ao estresse, influenciando processos como senescência, regulação da apoptose e adaptação metabólica. Alterações na função ou na expressão da catalase são frequentemente estudadas em contextos de fenótipos associados ao estresse oxidativo, incluindo neurodegeneração, disfunção cardiometabólica e modelos de lesão tecidual em sistemas murinos.

catalase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cat sem alterar a sequência de ADN subjacente.

catalase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cat em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cat, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de catalase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cat nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de catalase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via catalase em células tumorais com expressão de Cat silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.