caspase-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402563-ACT

CASP6 codifica a caspase-6, uma protease cisteína-aspartato que atua como uma caspase executora na morte celular regulada e na remodelação proteolítica de substratos celulares. A atividade da caspase-6 contribui para a sinalização apoptótica a jusante das caspases iniciadoras e interage com vias que controlam a integridade do citoesqueleto, o processamento de proteínas nucleares e a proteostase responsiva ao estresse. Alterações na expressão ou ativação de CASP6 têm sido associadas a processos neurodegenerativos, a contextos de sinalização inflamatória e a fenótipos relacionados à apoptose observados na biologia do câncer. Como um nó nas cascatas de caspases, a caspase-6 é frequentemente utilizada para investigar mecanismos dependentes de clivagem que moldam decisões de destino celular e a homeostase tecidual.

caspase-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CASP6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

caspase-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CASP6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CASP6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de caspase-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CASP6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de caspase-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via caspase-6 em células tumorais com expressão de CASP6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.