caspase-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419461-ACT

O gene Casp1 de camundongo codifica a caspase-1, uma protease inflamatória de cisteína que é ativada a jusante de inflamassomas canônicos como NLRP3, NLRC4 e AIM2. Após a ativação, a caspase-1 cliva a pró–IL-1β e a pró–IL-18 em suas formas maduras de citocinas e processa a gasdermina D para iniciar a morte celular piroptótica, conectando o reconhecimento de patógenos e sinais de perigo estéreis à resposta inflamatória. Essas vias moldam as respostas imunes inatas em tecidos mieloides e de barreira e são amplamente estudadas em contextos que incluem infecção, fenótipos autoinflamatórios, inflamação metabólica e neuroinflamação. A sinalização da caspase-1 se interconecta com o priming por NF-κB, redes de citocinas e programas de morte celular, tornando Casp1 um nó útil para dissecar mecanismos imunometabólicos e de resposta ao estresse em modelos murinos.

caspase-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Casp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

caspase-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Casp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Casp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de caspase-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Casp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de caspase-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via caspase-1 em células tumorais com expressão de Casp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.