CaMKKβ Double Nickaseプラスミド (h): sc-400928-NIC

CAMKK2はカルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼキナーゼ2（CaMKKβ）をコードしており、Ca2+–カルモジュリンシグナルをAMPKおよびCaMKI/CaMKIVのリン酸化へと結び付ける上流のSer/Thrキナーゼである。これにより、細胞のエネルギー感知、転写プログラム、カルシウム依存的ストレス応答が協調的に制御される。これらの結節点を介して、CaMKKβは代謝リモデリング、ミトコンドリア機能、オートファジー、さらにmTORやCREB関連シグナルなどの下流経路にも影響を及ぼす。CAMKK2活性は、がん細胞代謝、炎症と免疫細胞の分極、神経シグナル伝達といった文脈で研究されており、カルシウム駆動性のキナーゼカスケードを解析するための有用な標的となっている。CAMKK2を撹乱すると増殖や生存に関わる表現型が変化し、実験系において代謝および神経内分泌調節に関する疾患関連の変化と関連付けられている。

CaMKKβ ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CAMKK2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CAMKK2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CAMKK2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CAMKK2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。