CaMKIV Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400806-ACT

O CAMK4 humano codifica a CaMKIV, uma quinase nuclear de serina/treonina dependente de Ca2+/calmodulina que conecta transientes de cálcio a programas transcricionais que controlam a plasticidade neuronal, a ativação de células imunes e a expressão gênica ligada ao ciclo celular. A CaMKIV é ativada a jusante de CaMKK e integra sinais do influxo de cálcio e de vias de GPCR para fosforilar reguladores transcricionais como o CREB e modular processos associados à cromatina. Por meio desses mecanismos, influencia a diferenciação e a indução gênica dependente de estímulos em neurônios e linfócitos, com associações relatadas a sinalização inflamatória desregulada e a fenótipos neuropsiquiátricos. Sua posição na via torna o CAMK4 um nó útil para dissecar a transcrição dependente de cálcio, a sinalização sináptica e redes regulatórias do sistema imune.

CaMKIV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAMK4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CaMKIV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAMK4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAMK4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CaMKIV. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAMK4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CaMKIV no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CaMKIV em células tumorais com expressão de CAMK4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.