Plasmide Double Nickase (h) CaMKII delta: sc-400811-NIC

CAMK2D code la CaMKII delta, une kinase sérine/thréonine dépendante du Ca2+/de la calmoduline, qui intègre les signaux calciques intracellulaires en programmes de phosphorylation contrôlant le couplage excitation–contraction, l’organisation du cytosquelette et la transcription génique. CaMKII delta participe à des cascades de signalisation dépendantes du Ca2+ en aval des canaux ioniques et des récepteurs couplés aux protéines G, modulant des voies telles que la signalisation MAPK et des réponses transcriptionnelles médiées par CREB et des régulateurs apparentés. Dans les tissus humains, l’activité de CAMK2D est fréquemment étudiée dans le contexte de la physiologie cardiaque et du muscle lisse, où des altérations de l’homéostasie du calcium et de la signalisation des kinases sont associées à des phénotypes de remodelage inadaptatif. Une signalisation CaMKII delta dérégulée a également été explorée pour ses rôles plus larges dans les réponses au stress, la survie cellulaire et les réseaux de signalisation inflammatoire pertinents pour la recherche cardiométabolique et neurovasculaire.

CaMKII delta Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAMK2D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAMK2D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAMK2D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAMK2D.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.