CaMKII beta Double Nickaseプラスミド (h): sc-402744-NIC

CAMK2Bは、カルシウム／カルモジュリン依存性セリン／スレオニンキナーゼであるCaMKIIβサブユニットをコードしており、細胞内Ca2+の一過性変動をシナプス伝達や構造的可塑性を制御するリン酸化イベントへと変換します。CaMKIIβはホロ酵素の組み立てやFアクチンとの相互作用に寄与し、Ca2+流入を細胞骨格リモデリング、樹状突起スパイン動態、活動依存的遺伝子発現と結び付けます。グルタミン酸作動性シグナル伝達およびCa2+流入経路の下流で機能し、長期増強（LTP）や神経発達などの過程を協調的に制御します。CaMKIIβの活性または発現の異常は、神経発達に関わる表現型や神経興奮性の変化と関連付けられており、脳機能の機序解明や疾患関連シグナルネットワークの研究における重要性を支持しています。

CaMKII beta ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CAMK2B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CAMK2B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CAMK2Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CAMK2Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。