Calpain 10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423852-ACT

Capn10 codifica a calpaína 10, uma protease cisteína dependente de cálcio, não lisossomal, que modula a proteólise limitada de substratos intracelulares para regular a renovação de proteínas, a remodelação do citoesqueleto e a transdução de sinais. Em células de camundongo, a atividade da calpaína 10 tem sido associada à função mitocondrial, às respostas ao estresse oxidativo e à homeostase metabólica, influenciando vias que coordenam a sinalização da insulina e a utilização de glicose. A desregulação da expressão ou da atividade de CAPN10 tem sido associada a fenótipos metabólicos, incluindo alterações na sensibilidade à insulina e no balanço energético, sustentando sua relevância em estudos de mecanismos relacionados ao diabetes. Como uma protease capaz de remodelar redes de sinalização por meio de eventos de clivagem direcionados, a calpaína 10 é frequentemente investigada em contextos como biologia de adipócitos, metabolismo do músculo esquelético e remodelação induzida por estresse.

Calpain 10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Capn10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calpain 10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Capn10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Capn10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calpain 10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Capn10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calpain 10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calpain 10 em células tumorais com expressão de Capn10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.