Calpain 1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400929-NIC

ヒトのCAPN1は、カルシウム依存性システインプロテアーゼであるカルパイン1をコードしており、細胞骨格タンパク質やシグナル伝達タンパク質を限定的に加水分解することで、接着、遊走、膜リモデリング、ならびにシナプス機能を調節します。カルパイン1の活性は、細胞内Ca²⁺動態と内在性阻害因子カルパスタチンによって厳密に制御されており、CAPN1はCa²⁺制御型シグナル伝達、焦点接着のターンオーバー、プロテオスタシス経路と結び付いています。カルパインによる切断の制御不全は、神経細胞の損傷応答、神経変性過程、ならびに筋および細胞骨格の恒常性異常と関連することが報告されており、CAPN1はストレス依存的なリモデリングや細胞生存プログラムの解析において重要な結節点となります。CAPN1の攪乱は、下流のリン酸化ネットワークやプロテオリティックなプロセシングにも影響し、炎症性およびアポトーシス性シグナル伝達カスケードの形成を左右し得ます。

Calpain 1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CAPN1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CAPN1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CAPN1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CAPN1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。