Plásmido Doble Nickase (h) Calpain 1: sc-400929-NIC

El gen humano **CAPN1** codifica la calpaína 1, una proteasa de cisteína dependiente de calcio que realiza proteólisis limitada de proteínas del citoesqueleto y de señalización para modular la adhesión, la migración, la remodelación de la membrana y la función sináptica. La actividad de la calpaína 1 está estrechamente controlada por la dinámica intracelular de Ca²⁺ y por su inhibidor endógeno, la calpastatina, lo que vincula a **CAPN1** con la transducción de señales regulada por Ca²⁺, el recambio de adhesiones focales y las vías de proteostasis. La escisión mediada por calpaínas cuando está desregulada se ha asociado con respuestas a lesión neuronal, procesos neurodegenerativos y alteraciones de la homeostasis muscular y del citoesqueleto, lo que convierte a **CAPN1** en un nodo relevante para estudiar la remodelación dependiente del estrés y los programas de supervivencia celular. La alteración de **CAPN1** también puede influir en redes de fosforilación aguas abajo y en eventos de procesamiento proteolítico que dan forma a cascadas de señalización inflamatoria y apoptótica.

Calpain 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CAPN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CAPN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CAPN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CAPN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.