Calnexin双切口酶质粒(h): sc-400154-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Calnexin 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- Calnexin双切酶质粒（h）和Calnexin双切酶质粒（h2）编码针对CANX的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Calnexin: sc-23954，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Calnexin双切口酶质粒(h) | sc-400154-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calnexin双切口酶质粒(h2) | sc-400154-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类 CANX 基因编码钙连蛋白（calnexin），这是一种位于内质网（ER）膜上的凝集素型分子伴侣，能够结合单葡萄糖化的 N-连接糖链，从而促进新生糖蛋白的折叠与质量控制。钙连蛋白在钙连蛋白/钙网蛋白（calnexin/calreticulin）循环中与 ERp57 协同作用，协调二硫键形成、错误折叠底物的滞留，以及分泌通路中的转运决策。通过参与内质网蛋白稳态（proteostasis），CANX 与未折叠蛋白反应（UPR）、内质网相关降解（ERAD）以及细胞应激信号通路发生交叉，从而可能重塑抗原呈递与细胞存活程序。钙连蛋白依赖的折叠失衡与内质网应激常在蛋白质错误折叠相关疾病、代谢性炎症以及肿瘤细胞对分泌能力的需求等背景下被研究，因此 CANX 可作为开展机制性通路解析的一个功能节点。
Calnexin 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 CANX 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对CANX内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏CANX的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了CANX基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。