Calcyclin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404300-ACT

S100A6 codifica a calcyclina, uma pequena proteína ligante de Ca2+ do tipo “EF-hand” que atua como sensor de cálcio, conectando sinais dinâmicos de Ca2+ a alterações nas interações proteicas e no comportamento celular. A calcyclina associa-se a fatores do citoesqueleto e do tráfego de membranas, como as anexinas, e pode modular a remodelação de actina, a progressão do ciclo celular e a sinalização responsiva ao estresse. É frequentemente estudada em contextos de proliferação, migração e diferenciação, nos quais se relata expressão alterada de S100A6 em múltiplos tipos de tumores e em remodelação tecidual associada a fibrose e inflamação. Essas propriedades fazem de S100A6 um ponto útil para dissecar redes regulatórias dependentes de cálcio e seu impacto em transições de estado celular.

Calcyclin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de S100A6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calcyclin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus S100A6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição S100A6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calcyclin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus S100A6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calcyclin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calcyclin em células tumorais com expressão de S100A6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.