Plasmide CRISPR d'Activation (h) cadherin-8: sc-401576-ACT

CDH8 code la cadhérine‑8, un récepteur classique d’adhésion cellule‑cellule dépendant du calcium, qui médie des interactions homophiles afin de soutenir l’architecture tissulaire et la signalisation dépendante du contact. La cadhérine‑8 s’associe à des complexes de caténines au niveau des jonctions d’adhérence, reliant la membrane plasmique au cytosquelette d’actine et influençant des processus tels que la croissance des neurites, l’organisation synaptique et la migration cellulaire. En modulant la dynamique de l’adhésion et la stabilité des jonctions, CDH8 contribue à des voies qui coordonnent la morphogenèse et la formation des circuits dans le système nerveux en développement. Des altérations de l’expression ou de la régulation de CDH8 ont été impliquées dans des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la connectivité, de la différenciation et de la signalisation induite par l’adhésion.

cadherin-8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cadherin-8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cadherin-8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cadherin-8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cadherin-8 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.