cadherin-16 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401598-NIC

CDH16は、腎尿細管上皮に豊富に発現するカルシウム依存性の細胞間接着分子であるカドヘリン16をコードしており、上皮の極性および組織構築の維持に寄与します。カドヘリン16は、同種親和性（ホモフィリック）接着とカテニンとの結合を介して、アドヘレンスジャンクションの形成、細胞骨格の組織化、ならびに上皮の分化やバリア機能に関連するシグナル伝達過程に影響を与えます。CDH16の発現異常は尿細管の構造的完全性の破綻と関連し、腎疾患の病態や腎腫瘍の生物学において報告されていることから、上皮状態の制御におけるマーカーおよび機能的ハブとして有用であることが示唆されます。カドヘリン16を研究することで、接着結合の再構築、上皮の可塑性、そして状況依存的な細胞接着プログラムの変化について洞察が得られます。

cadherin-16 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDH16 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDH16内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDH16の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDH16が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。