cadherin-16 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401598-ACT

CDH16はカドヘリン16（cadherin-16）をコードしており、カルシウム依存性の細胞間接着分子として上皮組織に豊富に発現します。とくに腎尿細管の区画で高く発現し、組織構築や上皮の極性維持を支えています。カドヘリン16は、接着結合（アドヘレンスジャンクション）の形成・配置や細胞骨格リモデリングとの協調を通じて、接触依存性シグナル伝達や分化した上皮状態の維持に寄与します。CDH16発現の変化は上皮の完全性（インテグリティ）の破綻と関連することが報告されており、腎発生、腎生理、ならびに上皮性悪性腫瘍の生物学といった文脈で研究されています。系譜（リネージ）関連の接着マーカーとして、カドヘリン16は上皮のアイデンティティ、接着結合の安定性、腎細胞の分化プログラムを検討する際にしばしば用いられます。

cadherin-16 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDH16の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cadherin-16 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDH16 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDH16転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cadherin-16の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDH16遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcadherin-16依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDH16発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcadherin-16経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。