Plasmide CRISPR/Cas9 KO C5L2 (h): sc-410578

Présentation

C5AR2 code pour C5L2, un récepteur atypique du complément qui se lie à l’anaphylatoxine C5a ainsi qu’à C5a des-Arg, modulant la signalisation leucocytaire induite par le complément et le niveau global d’inflammation. Contrairement au récepteur canonique C5aR1, C5L2 est souvent décrit comme non couplé aux protéines G et peut moduler une signalisation liée à la β-arrestine, le dialogue entre récepteurs et des réponses en aval associées à MAPK/NF-κB dans les cellules myéloïdes et les cellules résidentes des tissus. Par son rôle dans les voies du complément et de l’immunité innée, C5AR2 influence la chimiotaxie, la production de cytokines et des programmes de résolution qui croisent l’inflammation cardiométabolique et les réponses aux lésions tissulaires. Des altérations de l’activité ou de l’expression de C5AR2 ont été étudiées dans des contextes d’inflammation systémique de type sepsis, d’athérosclérose et de troubles métaboliques, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans des modèles de maladies inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C5L2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C5AR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C5AR2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C5AR2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C5L2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C5AR2 pour l'étude de la signalisation de C5L2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C5AR2 essentiels à la fonction de C5L2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C5AR2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C5L2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le C5L2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus C5AR2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C5L2 plasmide HDR (h) et le C5L2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C5AR2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C5AR2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.