C4BPα Double Nickaseプラスミド (h): sc-404684-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- C4BPα Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- C4BPαダブルニカースプラスミド（h）およびC4BPαダブルニカースプラスミド（h2）は、C4BPAを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: C4BPα 抗体 (D-5): sc-398720
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
C4BPα Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404684-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
C4BPα Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404684-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
C4BPAはC4b結合タンパク質（C4BPα）のα鎖をコードしている。C4BPαは可溶性の調節因子として古典経路およびレクチン経路の補体系を制御し、C4bに結合してC3コンバターゼの崩壊を促進することで、補体の増幅を抑制する。さらにC4BPαは、因子IによるC4b切断の補因子として働くことにより免疫恒常性の維持に寄与し、宿主表面を過剰な補体介在性炎症から保護する。C4BPαは免疫複合体やアポトーシス由来物質のクリアランスにも関与し、自然免疫と獲得免疫の接点においてオプソニン化依存性の応答に影響を及ぼし得る。C4BPA/C4BPα活性の破綻は、自己免疫疾患や炎症性疾患でみられる補体バランスの異常、ならびに複数のがん種で研究されている腫瘍関連の免疫回避機構と関連づけられている。
C4BPα ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における C4BPA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、C4BPA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、C4BPAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、C4BPAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。