C1s CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404794-ACT

ヒトC1Sは補体C1sをコードしており、C1sは古典的補体経路を開始するC1複合体の一部を構成するセリンプロテアーゼです。活性化されるとC1sはC4およびC2を切断してC3転換酵素を生成し、オプソニン化、免疫複合体の除去、ならびに下流の炎症性シグナル伝達を促進します。C1s活性と補体活性化の制御破綻は、免疫介在性の組織傷害に関与すると考えられており、自己免疫様の表現型、炎症性疾患、補体駆動性の病態との関連が報告されています。そのためC1Sは、自然免疫、セリンプロテアーゼの制御、そして補体カスケードと細胞ストレス応答のクロストークの研究において広く注目されています。

C1s CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C1Sの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C1s CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C1S 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC1S転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C1sの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC1S遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC1s依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC1S発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC1s経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。