C1QBP Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419387-ACT

C1qbp codifica a C1QBP, uma proteína multifuncional associada à mitocôndria e à superfície celular, implicada na função do ribossomo mitocondrial, na homeostase da fosforilação oxidativa e na regulação de respostas celulares ao estresse. Em células de camundongo, a C1QBP tem sido associada ao controle da apoptose, à adaptação metabólica e à sinalização imune inata por meio de interações que influenciam processos relacionados ao complemento e sinais inflamatórios. A perturbação da expressão de C1QBP pode remodelar o metabolismo energético e o manejo de espécies reativas de oxigênio, afetando vias relevantes para a capacidade proliferativa e a homeostase tecidual. Essas funções tornam o C1qbp um alvo útil para estudar mecanismos de disfunção mitocondrial e fenótipos associados à inflamação em modelos relevantes para doenças.

C1QBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C1qbp sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C1QBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C1qbp em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C1qbp, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C1QBP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C1qbp nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C1QBP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C1QBP em células tumorais com expressão de C1qbp silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.