Plasmide CRISPR d'Activation (h) C1QBP: sc-400911-ACT

C1QBP (protéine de liaison au complément C1q ; p32/gC1qR) est une protéine humaine multifonctionnelle, enrichie dans les mitochondries et également détectée dans d’autres compartiments cellulaires, où elle contribue à la phosphorylation oxydative, à des processus associés aux ribosomes mitochondriaux et à la régulation des réponses cellulaires au stress. En influençant l’homéostasie des protéines mitochondriales et la bioénergétique, C1QBP établit un lien entre le contrôle métabolique, le traitement de l’ARN et des voies de signalisation qui modulent la prolifération et l’apoptose. Des altérations de l’expression ou de la localisation de C1QBP ont été associées à une dysrégulation de la fonction mitochondriale et de la signalisation inflammatoire, des contextes fréquemment étudiés en biologie du cancer, dans la neurodégénérescence et en physiopathologie immunitaire. Ainsi, C1QBP est largement utilisée comme un nœud d’analyse pour disséquer les mécanismes centrés sur la mitochondrie qui couplent le métabolisme aux décisions de destin cellulaire.

C1QBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C1QBP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C1QBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C1QBP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C1QBP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C1QBP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C1QBP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C1QBP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C1QBP dans les cellules tumorales présentant une expression de C1QBP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.