C1QBP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400911-ACT

C1QBP (proteína de ligação ao C1q do complemento; p32/gC1qR) é uma proteína humana multifuncional enriquecida nas mitocôndrias e também detectada noutros compartimentos celulares, onde contribui para a fosforilação oxidativa, para processos associados ao ribossoma mitocondrial e para a regulação de respostas celulares ao stress. Ao influenciar a homeostase de proteínas mitocondriais e a bioenergética, a C1QBP liga o controlo metabólico ao processamento de RNA e a vias de sinalização que moldam a proliferação e a apoptose. Alterações na expressão ou na localização de C1QBP têm sido associadas a disfunção mitocondrial e a sinalização inflamatória desregulada, contextos frequentemente estudados em biologia do cancro, neurodegeneração e fisiopatologia relacionada com o sistema imunitário. Assim, a C1QBP é amplamente utilizada como um ponto central para dissecar mecanismos centrados nas mitocôndrias que acoplam o metabolismo a decisões de destino celular.

C1QBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C1QBP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C1QBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C1QBP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C1QBP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C1QBP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C1QBP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C1QBP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C1QBP em células tumorais com expressão de C1QBP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.