Plasmide CRISPR d'Activation (h) C1q-C: sc-403618-ACT

C1QC code pour la chaîne C du composant du complément C1q, une molécule de reconnaissance initiatrice de la voie classique du complément qui se lie aux complexes immuns et aux structures du soi altérées afin de déclencher l’activation du complément en aval. Au-delà de la protéolyse du complément, C1q influence la clairance par phagocytose, l’élimination des cellules apoptotiques et la signalisation inflammatoire via des interactions avec des récepteurs de surface présents sur les cellules myéloïdes et les cellules immunitaires résidentes des tissus. La biologie de C1q est étroitement liée à la surveillance immunitaire innée et à l’homéostasie tissulaire, et une activité du complément dérégulée a été associée à une inflammation chronique et à des phénotypes de type auto-immun. Une expression modifiée de C1QC est également utilisée comme marqueur d’états spécifiques des macrophages/microglies, pertinents pour la neuroinflammation ainsi que pour des microenvironnements immunitaires associés à la fibrose ou aux tumeurs.

C1q-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C1QC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C1q-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C1QC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C1QC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C1q-C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C1QC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C1q-C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C1q-C dans les cellules tumorales présentant une expression de C1QC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.