C1q-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403618-ACT

C1QC codifica a cadeia C do componente C1q do complemento, uma molécula de reconhecimento iniciadora da via clássica do complemento que se liga a complexos imunes e a estruturas próprias alteradas para desencadear a ativação do complemento a jusante. Para além da proteólise do complemento, o C1q influencia a depuração fagocítica, a remoção de células apoptóticas e a sinalização inflamatória por meio de interações com recetores de superfície celular em células imunes mieloides e residentes nos tecidos. A biologia do C1q está intimamente ligada à vigilância imunitária inata e à homeostase tecidular, e a atividade do complemento desregulada tem sido associada a inflamação crónica e a fenótipos do tipo autoimune. A expressão alterada de C1QC também é usada como marcador de estados específicos de macrófagos/micróglia relevantes para a neuroinflamação e para microambientes imunes associados a fibrose ou tumores.

C1q-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C1QC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C1q-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C1QC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C1QC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C1q-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C1QC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C1q-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C1q-C em células tumorais com expressão de C1QC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.