Plasmide CRISPR d'Activation (h) C1orf115: sc-413237-ACT

C1orf115 (humain) code une protéine encore mal caractérisée, dont l’annotation fonctionnelle reste limitée, ce qui suggère des rôles potentiellement dépendants du contexte et qui seraient idéalement élucidés par des études de perturbation. Les jeux de données disponibles de transcriptomique et de protéomique indiquent des profils d’expression spécifiques à certains types cellulaires, ce qui plaide pour son étude dans la différenciation de lignées, les programmes d’adaptation au stress ou d’autres états cellulaires régulés. Comme les liens mécanistiques avec les voies de signalisation canoniques ne sont pas encore clairement établis, la modulation de l’expression de C1orf115 est utile pour cartographier les réponses transcriptionnelles en aval et les réseaux d’interactions protéiques. Les signatures d’expression altérées de cadres de lecture ouverts non caractérisés tels que C1orf115 sont fréquemment examinées dans des jeux de données en oncologie et en neurobiologie, ce qui en fait une cible pertinente pour des études exploratoires de voies associées aux maladies, sans présupposer de relation causale.

C1orf115 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C1orf115 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C1orf115 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C1orf115 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C1orf115, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C1orf115. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C1orf115 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C1orf115 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C1orf115 dans les cellules tumorales présentant une expression de C1orf115 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.