c-Kit Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400106-NIC

O KIT codifica o receptor tirosina-quinase c-Kit (CD117), um receptor do fator de células-tronco (SCF) que regula a sobrevivência, a proliferação, a migração e o comprometimento de linhagem em progenitores hematopoéticos, melanócitos, células germinativas e células intersticiais de Cajal. A dimerização induzida por ligante e a autofosforilação ativam as vias PI3K–AKT, RAS–MAPK, JAK–STAT e a sinalização da família SRC, coordenando a progressão do ciclo celular e programas de diferenciação. A sinalização desregulada de KIT, incluindo mutações ativadoras ou expressão aberrante, está implicada em processos oncogênicos e associados a mastócitos, enquanto variantes de perda de função podem perturbar a hematopoiese e a biologia da pigmentação. Essas características fazem do c-Kit um ponto amplamente utilizado para estudar a sinalização de receptores tirosina-quinase, decisões de destino celular e a intercomunicação entre vias em modelos celulares humanos.

c-Kit O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus KIT em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de KIT. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função KIT. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com KIT interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.