C/EBP α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400195-ACT

CEBPA codifica o fator de transcrição C/EBPα, uma proteína do tipo zíper de leucina básica que regula o comprometimento de linhagem e a diferenciação terminal, particularmente em programas granulocíticos e adipocíticos. Ao ligar-se a motivos CCAAT/enhancer, o C/EBPα coordena redes transcricionais que controlam a restrição do ciclo celular, a expressão de genes metabólicos e a maturação mieloide, com interseções funcionais entre vias de sinalização de citocinas e vias regulatórias da cromatina. A expressão alterada ou mutações em CEBPA estão frequentemente associadas a hematopoiese desregulada e a fenótipos de bloqueio de diferenciação, tornando-o um alvo amplamente estudado no controle transcricional da identidade mieloide. Essas propriedades posicionam o C/EBPα como um modelo útil para investigar efeitos de dosagem de fatores de transcrição, a lógica de enhancers e transições de estado de diferenciação em células humanas.

C/EBP α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CEBPA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C/EBP α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CEBPA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CEBPA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C/EBP α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CEBPA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C/EBP α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C/EBP α em células tumorais com expressão de CEBPA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.