BTLA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417186-ACT

BTLA (associado a linfócitos B e T) é um receptor imunorregulador da superfamília CD28 expresso em múltiplos subtipos de linfócitos, no qual atua como um checkpoint inibitório para conter a sinalização do receptor de antígeno e manter a tolerância periférica. Após a ligação ao seu ligante HVEM (TNFRSF14), o BTLA recruta fosfatases por meio de motivos citoplasmáticos ITIM/ITSM para atenuar cascatas de quinases proximais, moldando a ativação de células T, a produção de citocinas e a homeostase imune. Essa via se cruza com redes coinibitórias mais amplas que calibram as respostas imunes adaptativas durante a inflamação e a exposição crônica a antígenos. Alterações na expressão ou na sinalização de BTLA têm sido associadas à desregulação imune e foram estudadas nos contextos de autoimunidade, infecção e imunologia tumoral.

BTLA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BTLA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BTLA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BTLA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BTLA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BTLA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BTLA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BTLA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BTLA em células tumorais com expressão de BTLA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.