Plasmide CRISPR d'Activation (h) BTBD4: sc-405127-ACT

ZBTB46 code chez l’humain la protéine à doigts de zinc et domaine BTB BTBD4, un régulateur transcriptionnel impliqué dans le maintien de l’identité de lignée des cellules dendritiques et dans la limitation des programmes d’activation des cellules présentatrices d’antigène dérivées de l’hématopoïèse. Grâce à des interactions protéiques médiées par le domaine BTB/POZ et à son activité de liaison à l’ADN, BTBD4 influence des réseaux d’expression génique qui façonnent la différenciation myéloïde, l’homéostasie immunitaire et une signalisation inflammatoire dépendante du contexte. Une régulation altérée des programmes transcriptionnels associés à ZBTB46 a été liée à une dérégulation immunitaire et à des phénotypes du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible utile pour des études sur la présentation d’antigènes, l’immunosuppression et la plasticité des lignées. Ces fonctions placent BTBD4 au carrefour du contrôle transcriptionnel, des décisions de destin cellulaire et des voies de signalisation immunitaire pertinentes pour les modèles de cancer et de maladies inflammatoires.

BTBD4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZBTB46 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BTBD4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZBTB46 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZBTB46, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BTBD4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZBTB46 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BTBD4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BTBD4 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZBTB46 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.