BRD4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400519-ACT

ヒトBRD4は、アセチル化ヒストンに結合してクロマチンのアクセス性とRNAポリメラーゼII依存的転写を制御する、BETファミリーのブロモドメインタンパク質をコードします。BRD4はP-TEFbを介して転写伸長を協調的に制御し、エンハンサーおよびスーパーエンハンサーの活性を支えることで、細胞周期進行、DNA損傷応答、NF-κBなどの炎症シグナル伝達に関連するプログラムを形成します。これらのエピジェネティックな機能を通じて、BRD4は系譜特異的な遺伝子発現や細胞状態の移行に影響を与えます。BRD4活性の破綻やエンハンサーの再配線は、がん研究、免疫介在性の生物学、ならびにウイルス—宿主間の転写制御の分野で頻繁に研究されており、BRD4は転写・クロマチン研究における中心的なノードとなっています。

BRD4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BRD4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BRD4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BRD4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBRD4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BRD4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBRD4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBRD4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBRD4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBRD4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。