BMP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402432-ACT

BMP1 codifica a proteína morfogenética óssea 1 (BMP-1), uma metaloprotease secretada da família astacina que promove a maturação da matriz extracelular (MEC) ao processar proteoliticamente os procolágenos e ativar fatores associados à matriz. Por meio de eventos de clivagem que sustentam a fibrilogênese do colágeno e a organização da membrana basal, a BMP-1 contribui para a arquitetura do tecido conjuntivo, o remodelamento tecidual e a renovação da MEC associada ao reparo de feridas. A atividade da BMP-1 interage funcionalmente com a sinalização de TGF-β e com vias matricelulares ao modular a disponibilidade e o estado de ativação de fatores de crescimento ligados à MEC e de componentes estruturais. A desregulação da expressão de BMP1 ou da atividade proteolítica tem sido implicada no remodelamento fibrótico e em fenótipos hereditários do tecido conjuntivo caracterizados por processamento alterado do colágeno.

BMP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BMP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BMP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BMP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BMP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMP-1 em células tumorais com expressão de BMP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.