BLOS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406776

概要

BLOC1S2はBLOS2をコードしており、BLOS2はエンドソーム輸送とカーゴ選別を協調的に制御する「リソソーム関連オルガネラ形成複合体1（BLOC-1）」の中核サブユニットです。BLOC-1がアダプタータンパク質複合体や細胞骨格輸送機構と相互作用することで、BLOS2は膜タンパク質をエンドソーム、リソソーム、およびリソソーム関連オルガネラへ送達する過程に関与し、小胞成熟や細胞恒常性に影響を与えます。BLOC-1構成要素の破綻は、神経突起伸長の変化、シナプス小胞動態の異常、さらにメラノソームのような特殊オルガネラに依存する色素形成経路の欠陥と関連づけられてきました。このためBLOC1S2は、エンドリソソーム経路の攪乱がシグナル伝達やプロテオスタシスに影響し得る、細胞内輸送障害や神経生物学の文脈で研究されています。

BLOS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBLOC1S2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BLOC1S2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BLOC1S2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、BLOS2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、BLOS2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BLOC1S2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• BLOS2の機能に不可欠なBLOC1S2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BLOC1S2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• BLOS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびBLOS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BLOC1S2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  BLOS2 HDRプラスミド（h）および BLOS2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBLOC1S2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBLOC1S2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。