Biglycan Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401408-ACT

BGN codifica a biglicana, um pequeno proteoglicano secretado rico em repetições de leucina que se liga a colagénios e regula a montagem da matriz extracelular (MEC), a mecânica dos tecidos e a sinalização pericelular em tecidos conjuntivos. A biglicana modula a disponibilidade de fatores de crescimento e a sinalização de recetores, cruzando-se com vias como TGF-β/SMAD, Wnt/β-catenina e a adesão mediada por integrinas, influenciando a proliferação celular, a migração e as respostas inflamatórias. Na biologia humana, alterações na expressão de BGN e na remodelação da MEC estão frequentemente associadas a processos fibróticos, interações tumor–estroma e fisiopatologia vascular e musculoesquelética, tornando-o um alvo útil para estudar a sinalização impulsionada pela matriz. As suas funções na ativação da imunidade inata e na regulação de citocinas também sustentam investigações mecanísticas sobre a remodelação tecidual ligada à inflamação.

Biglycan O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BGN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Biglycan O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BGN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BGN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Biglycan. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BGN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Biglycan no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Biglycan em células tumorais com expressão de BGN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.