BGT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420468

概要

Slc6a12は、ベタイン／GABAトランスポーターBGT-1（SLC6A12）をコードする。BGT-1はNa⁺/Cl⁻依存性のSLC6神経伝達物質トランスポーターファミリーに属し、浸透圧調節物質（オスモライト）であるベタインの細胞内取り込みを担うほか、条件によってはGABAも輸送しうる。BGT-1は細胞内への有機オスモライトの蓄積を支えることで、浸透圧ストレスへの適応と細胞容積調節に寄与し、膜輸送を浸透圧保護プログラムや代謝恒常性と結び付ける。マウス組織では、Slc6a12の発現は腎上皮や神経系で検討されており、トランスポーター活性の変化が抑制性トーンやストレス応答性シグナル伝達に影響し得る。オスモライト制御とGABA作動性バランスの破綻は、腎の浸透圧障害、神経炎症、発作感受性のモデルと関連するため、Slc6a12は機序解明の経路研究に有用な標的となる。

BGT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSlc6a12遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Slc6a12内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Slc6a12のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、BGT-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、BGT-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Slc6a12欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• BGT-1の機能に不可欠なSlc6a12エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Slc6a12ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• BGT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびBGT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc6a12遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  BGT-1 HDRプラスミド（m）および BGT-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSlc6a12ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSlc6a12標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。