beta Arrestin 1CRISPR激活质粒(h): sc-400642-ACT

ARRB1 编码 β-抑制蛋白 1（beta Arrestin 1），这是一种多功能衔接蛋白，可在激动剂刺激后调控 G 蛋白偶联受体（GPCR）的去敏化、受体内吞以及转运。β-抑制蛋白 1 除了终止 G 蛋白信号外，还可作为支架组装信号复合体，调节 MAPK/ERK、PI3K–AKT 和 NF-κB 通路的输出，从而塑造情境依赖性的转录反应与细胞骨架动态。通过这些作用，ARRB1 影响包括趋化、内吞以及多种受体下游信号整合在内的生物过程。抑制蛋白介导的信号调控失衡与增殖和炎症相关信号状态的改变有关，而这些改变与肿瘤生物学、心脏代谢调控以及与神经精神相关的 GPCR 回路密切相关。

beta Arrestin 1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ARRB1的表达。

beta Arrestin 1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ARRB1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ARRB1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性beta Arrestin 1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ARRB1位点，并能够研究内源性位点上依赖于beta Arrestin 1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ARRB1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟beta Arrestin 1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。