beta Actin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400000-NIC

ACTB codifica a beta-actina humana, uma proteína do citoesqueleto altamente conservada que polimeriza em microfilamentos para sustentar a forma celular, a integridade mecânica e o transporte intracelular. A dinâmica da beta-actina coordena-se com proteínas ligantes de actina em vias que controlam a adesão celular, a migração, a citocinese e a endocitose, e conecta-se a redes de sinalização como a regulação, por GTPases da família Rho, do remodelamento de actina. Como a arquitetura de actina influencia a organização da cromatina e a mecanotransdução, ACTB é frequentemente usado como referência de homeostase celular, ao mesmo tempo que atua como um nó funcional em estudos de motilidade e de respostas celulares ao estresse. Alterações na regulação da actina e em processos do citoesqueleto associados a ACTB estão implicadas em diversos fenótipos relevantes para doenças, incluindo invasão alterada, defeitos de desenvolvimento e patologias do citoesqueleto.

beta Actin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ACTB em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ACTB. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ACTB. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ACTB interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.