beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β₃-AR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403301-ACT

ADRB3 codifica o receptor β3-adrenérgico humano, um receptor acoplado à proteína G que aciona preferencialmente a sinalização via Gs para estimular a adenilil ciclase, elevar os níveis de cAMP e ativar programas transcricionais e metabólicos dependentes de PKA. Em adipócitos e outras células metabolicamente ativas, o ADRB3 contribui para a regulação da lipólise, de respostas termogênicas e do gasto energético por meio de cAMP/PKA e da expressão gênica mediada por CREB a jusante, com crosstalk de sinalização com vias de MAPK dependendo do contexto celular. Alterações na expressão ou na sinalização de ADRB3 têm sido estudadas no contexto de obesidade e resistência à insulina, bem como em fenótipos cardiometabólicos mais amplos, nos quais o tônus adrenérgico influencia o metabolismo celular e as respostas ao estresse. Como o β3-AR modula a dinâmica de segundos mensageiros e mecanismos de dessensibilização do receptor, ele é frequentemente utilizado para investigar o tráfego de GPCRs, o viés de ligantes e a reprogramação de vias metabólicas.

beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADRB3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADRB3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADRB3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADRB3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via beta 3 Adrenergic Receptor/ADRB3/β3-AR em células tumorais com expressão de ADRB3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.