Bcl10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400483-ACT

BCL10 codifica a Bcl10, uma proteína adaptadora que conecta a sinalização do receptor de antígeno a programas transcricionais a jusante em células imunes. A Bcl10 atua no complexo CARMA1–Bcl10–MALT1 (CBM) para promover a ativação canônica de NF-κB, sustentando a ativação e a proliferação de linfócitos e respostas de citocinas, e também pode influenciar a sinalização de MAPK e a apoptose. A atividade ou a localização desregulada de BCL10 tem sido associada a alterações na saída da via de NF-κB e na homeostase imune, sendo frequentemente estudada no contexto da biologia de neoplasias linfoides e de redes de sinalização inflamatória. Como resultado, BCL10 é um nó comum em estudos mecanísticos de sinalização proximal ao receptor, regulação transcricional e crosstalk entre vias.

Bcl10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BCL10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Bcl10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BCL10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BCL10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Bcl10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BCL10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Bcl10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Bcl10 em células tumorais com expressão de BCL10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.