BBS10 Plasmide Double Nickase (h): sc-408538-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BBS10 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BBS10 Double Nickase Plasmid (h) e il BBS10 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BBS10. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BBS10 Antibody (A-3): sc-518239
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BBS10 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408538-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BBS10 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408538-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BBS10 codifica una proteina simile alle chaperonine che agisce all’interno del complesso BBSome/chaperonine, supportando la ciliogenesi e l’assemblaggio/traffico delle proteine di membrana ciliare. Attraverso il suo ruolo nella formazione del ciglio primario e nei processi legati al trasporto intraflagellare, BBS10 influenza reti di segnalazione dipendenti dalle ciglia, tra cui Hedgehog e altre vie sensoriali che coordinano polarità cellulare, proliferazione e differenziamento. L’alterazione di BBS10 compromette la struttura delle ciglia e il traffico dei recettori, collegandolo a fenotipi pleiotropici caratteristici delle ciliopatie. Il BBS10 umano è quindi ampiamente studiato in modelli della sindrome di Bardet–Biedl e di altri disturbi associati alle ciglia, per indagare i meccanismi dello sviluppo degli organi, del metabolismo e della funzione sensoriale.
BBS10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BBS10 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BBS10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BBS10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BBS10 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.