band 3CRISPR激活质粒(h): sc-401705-ACT

SLC4A1 编码 band 3（阴离子交换体 1，AE1），这是一种在红细胞膜上含量极高的膜蛋白，可催化电中性的 Cl⁻/HCO₃⁻ 交换，从而支持 CO₂ 转运、全身酸碱平衡以及红细胞离子稳态。band 3 通过与细胞骨架和糖酵解酶的相互作用，促进膜稳定性、维持细胞形态，并在质膜处组织多蛋白复合体。在肾脏的闰细胞中，AE1 参与碳酸氢盐的处理与 pH 调控，将 SLC4A1 与关键的转运及稳态通路联系起来。SLC4A1 的遗传或功能异常与红细胞膜疾病以及酸化过程缺陷相关，因此是研究红细胞生物学与上皮转运机制的重要靶点。

band 3 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC4A1的表达。

band 3 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SLC4A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SLC4A1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性band 3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SLC4A1位点，并能够研究内源性位点上依赖于band 3的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC4A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟band 3通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。