BAF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401654
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- BAF O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico BAF, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:BAF Anticorpo (A-11): sc-166324
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
BAF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401654 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
BANF1 codifica o fator de barreira à autointegração (BAF), uma proteína conservada de ligação ao DNA que conecta o DNA de dupla fita a proteínas do envelope nuclear com domínio LEM e dá suporte à organização da cromatina. O BAF é essencial para a remontagem do envelope nuclear após a mitose, para a regulação da arquitetura da cromatina em níveis superiores e para a manutenção da estabilidade do genoma ao longo do ciclo celular. Por meio de suas interações com lamínas, emerina e outros componentes da lâmina nuclear, o BAF influencia programas transcricionais ligados à estrutura nuclear e à mecanotransdução. A desregulação de BANF1/BAF tem sido associada a envelopatias nucleares e fenótipos progeroides, tornando-o relevante para o estudo de mecanismos de doença relacionados à integridade nuclear e à desregulação da cromatina.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO BAF (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene BANF1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do BANF1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do BANF1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína BAF.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de BANF1 para a investigação da sinalização de BAF, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) BANF1 críticos para a função BAF
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos BANF1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo BAF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo BAF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus BANF1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo BAF Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR BAF (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia BANF1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo BANF1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.