Axin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401074-ACT

AXIN1 codifica a proteína humana de ancoragem (scaffold) Axin, um componente central do complexo de destruição da β-catenina que modula a sinalização Wnt canônica por meio de interações coordenadas com APC, GSK3β e CK1. Ao promover a fosforilação da β-catenina e sua degradação pelo proteassoma, a Axin ajuda a regular programas transcricionais que controlam a especificação do destino celular, a proliferação e a diferenciação, além de se relacionar com a organização do citoesqueleto e a sinalização de resposta ao estresse. A disrupção de AXIN1 pode alterar a saída da via Wnt e modificar redes de desenvolvimento e homeostase tecidual, tornando-o relevante para estudos de reprogramação de sinalização na biologia do câncer e em outros contextos de ativação aberrante de vias. Assim, AXIN1 é amplamente utilizado como um ponto de entrada mecanístico para investigar a transcrição dependente de Wnt/β-catenina e o crosstalk entre vias em modelos celulares humanos.

Axin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AXIN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Axin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AXIN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AXIN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Axin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AXIN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Axin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Axin em células tumorais com expressão de AXIN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.