AVP Receptor V1a Double Nickaseプラスミド (h): sc-401691-NIC

AVPR1Aはヒトのアルギニン・バソプレシン受容体1A（AVP受容体V1a）をコードしており、主としてGq/11に共役するGタンパク質共役型受容体（GPCR）です。これによりホスホリパーゼCβが活性化され、細胞内Ca²⁺濃度とジアシルグリセロールが上昇して、プロテインキナーゼC（PKC）シグナル伝達が駆動されます。この受容体は、血管平滑筋の収縮、血小板機能、肝臓でのグリコーゲン分解、神経内分泌シグナル伝達を調節し、末梢組織と中枢神経系にまたがるバソプレシン応答を統合します。AVPR1A依存性経路はMAPK/ERKや即時早期遺伝子（immediate-early gene）プログラムとも交差しており、受容体活性化を状況依存的な転写応答および細胞応答へと結び付けます。AVPR1Aシグナルの異常や遺伝的変異は、心血管・代謝表現型に加えて神経行動学的形質との関連でも研究されており、バソプレシン応答性経路の機序解析における重要性が示唆されています。

AVP Receptor V1a ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AVPR1A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AVPR1A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AVPR1Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AVPR1Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。